ATCC細胞轉(zhuǎn)化試驗有形態(tài)計數(shù)法、MTT法和同位素法三種。MTT法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法，MTT是一種噻唑鹽，化學(xué)名3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑，水溶液為黃橙色。小鼠脾細胞受到ConA作用后發(fā)生增殖活化，其胞內(nèi)線粒體琥珀酸脫氫酶活性相應(yīng)升高，MTT作為其底物參與反應(yīng)，形成藍色的甲臜（Formazan）顆粒沉積于細胞內(nèi)或細胞周圍，經(jīng)鹽酸─異丙醇溶解后為藍色溶液，可用酶標測定儀測定細胞培養(yǎng)物的OD值，測定波長570nm，根據(jù)OD值的大小計算反應(yīng)體系中細胞增殖程度。
ATCC細胞觀察培養(yǎng)時的主要事項說明：
1.肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，再借助顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X，200X各一張），這樣做可方便后期的對比。
2.用75%的酒精消毒（75%的酒精的水要經(jīng)過殺菌處理）。
3.嚴格按照在無菌環(huán)境下操作的原則，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（要換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml，顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
您的位置：網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > ATCC細胞觀察培養(yǎng)時的主要事項說明 
QQ交談
在線交流
咨詢電話